Estudio de la infección por Leishmania infantum en el perro: utilidad de las técnicas diagnósticas no invasivas y nuevas alternativas terapéuticas

La leishmaniosis canina (Lcan) causada por Leishmania infantum es una zoonosis de distribución mundial endémica en la cuenca mediterránea. Es transmitida a humanos y animales mediante la picadura de las hembras de flebotomos, siendo el perro tanto un hospedador natural como el principal reservorio. Las manifestaciones clínicas de la infección por L. infantum en el perro son muy variables, desde una infección subclínica crónica hasta una enfermedad grave, que puede ser fatal. Debido a su compleja patogénesis y al importante papel que juega la respuesta inmunitaria, tanto el diagnóstico como el tratamiento y prevención de esta enfermedad son un reto desde el punto de vista veterinario y de Salud Pública. El objetivo fundamental de esta Tesis Doctoral ha sido encontrar nuevas alternativas tanto diagnósticas como terapéuticas en la Lcan. En cuanto al diagnóstico se ha evaluado el uso de muestras obtenidas de forma menos invasiva y dolorosa, y mejor aceptadas por los perros y por ende por sus propietarios. Y con respecto al tratamiento, se han evaluado dos nuevas moléculas buscando que sea más económico, eficaz, bien tolerado y de fácil administración. Para ello se han realizado tres ensayos clínicos: los dos primeros con un modelo experimental canino y el tercero en perros con infección natural por L. infantum. Para los dos primeros ensayos se empleó el mismo modelo experimental canino, que consistió en ocho perras de raza Beagle infectadas experimentalmente con L. infantum, a razón de 5x107 promastigotes/ml por vía intravenosa...

Estudio de la enfermedad renal y la respuesta al tratamiento (antimoniales "versus" miltefosina) en perros con infección natural por "Leishmania infantum"

La leishmaniosis canina (Lcan) es una zoonosis en toda la Cuenca Mediterránea y está producida por un protozoo intracelular, Leishmania infantum, transmitido por especies del género Phlebotomus. La enfermedad se caracteriza por una presentación clínica heterogénea en la cual la lesión renal es, con frecuencia, la causa principal de mortalidad. La nefropatía asociada a Lcan se atribuye fundamentalmente al depósito intraglomerular de inmunocomplejos circulantes. La combinación de antimoniato de n-meglumina (antimoniales) con alopurinol se considera el tratamiento de primera línea en esta enfermedad, aunque algunos estudios han demostrado que la combinación de miltefosina y alopurinol tiene una eficacia similar. A pesar de ser considerado el tratamiento más eficaz, el uso de antimoniato se asocia a efectos adversos sobre la funcionalidad renal lo cual puede ocasionar complicaciones importantes en el manejo de estos pacientes. A ello se suma la escasa sensibilidad de las pruebas diagnósticas disponibles hasta ahora en la clínica veterinaria para poder establecer un diagnóstico precoz de lesión renal. Es decir, el propio tratamiento podría agravar una posible alteración en la funcionalidad renal en pacientes que ya la tuvieran alterada debido a la leishmaniosis. Los perros infectados y tratados, en la mayoría de los casos, no alcanzan la curación parasitológica y sufren recidivas después del tratamiento. Las técnicas habituales para valorar la respuesta al tratamiento son la evolución de la tasa de anticuerpos y la electroforesis de proteínas plasmáticas. La normalización de las proteínas plasmáticas ocurre en paralelo con la mejoría clínica, pudiéndose emplear como marcadores de respuesta al tratamiento; sin embargo, la serología parece menos útil, a corto plazo, porque el descenso del título de anticuerpos es más lento. Se ha postulado que otros parámetros laboratoriales, como las proteínas de fase aguda, pueden ser una buena opción como marcadores precoces de la enfermedad y también para la monitorización del tratamiento...

Papel del mecanismo de inmunoadherencia de "Leishmania" en la infección humana

La leishmaniosis es una enfermedad parasitaria causada por protozoos hemoflagelados del genero Leishmania que se transmite al hombre y a otros vertebrados a través de la picadura de un díptero de la familia Plebotominae. Cuando un flebótomo infectado pica al hospedador vertebrado, perfora la piel con su probóscide buscando las vénulas de la dermis, las lacera y provoca un pequeño hematoma donde deposita los promastigotes. Tras el contacto con la sangre tiene lugar la activación del complemento y deposición del C3 en la superficie del parásito. En primates, los promastigotes opsonizados se unen a eritrocitos y posteriormente son transferidos a las células aceptoras de la sangre: los leucocitos...

Evidence of Leishmania infantum infection in rabbits (Oryctolagus cuniculus) in a natural area in Madrid, Spain

Leishmaniasis is one of most important neglected zoonosis and remains endemic in at least 88 developing countries in the world. In addition, anthropogenic environmental changes in urban areas are leading to its emergency world-wide. Zoonotic leishmaniasis control might only be achieved by an integrated approach targeting both the human host and the animal reservoirs, which in certain sylvatic cycles are yet to be identified. Recently, hares have been pointed out as competent reservoirs of Leishmania infantum in Spain, but the role of other lagomorphs has not been clarified. Here, 69 rabbits (Oryctolagus cuniculus) from a natural area in Madrid in which a high density was present were analyzed using indirect (immunofluorescence antibody test, IFAT) and direct (PCR, culture) techniques. Fifty-seven (82.6%) of the animals were positive to at least one technique, with IFAT yielding the highest proportion of positive samples. L. infantum was isolated in 13% animals demonstrating the occurrence of infection in this setting. Our results suggest that rabbits could play a role of competent reservoir of L. infantum and demonstrate that the prevalence of infection is high in the analyzed area.

Assessment of the sensitivity and specificity of serological (IFAT) and molecular (direct PCR) techniques for diagnosis of leishmaniasis in lagomorphs using a Bayesian approach

Leishmaniasis, caused by Leishmania infantum, is a vector-borne zoonotic disease that is endemic to the Mediterranean basin. The potential of rabbits and hares to serve as competent reservoirs for the disease has recently been demonstrated, although assessment of the importance of their role on disease dynamics is hampered by the absence of quantitative knowledge on the accuracy of diagnostic techniques in these species. A Bayesian latent-class model was used here to estimate the sensitivity and specificity of the Immuno-fluorescence antibody test (IFAT) in serum and a Leishmania-nested PCR (Ln-PCR) in skin for samples collected from 217 rabbits and 70 hares from two different populations in the region of Madrid, Spain. A two-population model, assuming conditional independence between test results and incorporating prior information on the performance of the tests in other animal species obtained from the literature, was used. Two alternative cut-off values were assumed for the interpretation of the IFAT results: 1/50 for conservative and 1/25 for sensitive interpretation. Results suggest that sensitivity and specificity of the IFAT were around 70–80%, whereas the Ln-PCR was highly specific (96%) but had a limited sensitivity (28.9% applying the conservative interpretation and 21.3% with the sensitive one). Prevalence was higher in the rabbit population (50.5% and 72.6%, for the conservative and sensitive interpretation, respectively) than in hares (6.7% and 13.2%). Our results demonstrate that the IFAT may be a useful screening tool for diagnosis of leishmaniasis in rabbits and hares. These results will help to design and implement surveillance programmes in wild species, with the ultimate objective of early detecting and preventing incursions of the disease into domestic and human populations.